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PCR检测样本前处理与核酸制备操作规范

📅 发布时间:2026-09-18 🔗 来源: 👁️ 浏览量:53
  1. 将样品剪碎后取 10 g 至研钵中
    将样品尽可能剪碎,便于后续充分处理和提取。

  2. 将样品充分捣碎、混匀
    使样品更加均匀,减少取样差异,提高后续检测的代表性。

  3. 取 5 g 捣碎后的样品至无菌袋中
    取定量样品进行后续处理,同时使用无菌耗材以减少外源污染。

  4. 加入 10 mL 生理盐水
    对样品进行悬浮和提取,使目标成分进入液相。

  5. 充分混匀样品
    使样品与生理盐水充分接触,获得较均匀的样品悬液。

  6. 用镊子取 20–30 mg 均质固体至 PCR 管中
    取少量均质后的样品作为PCR检测的前处理样本。

  7. 加入 500 μL Buffer A,振荡混匀
    加入前处理缓冲液,使样品中的目标核酸释放到处理体系中。

  8. 80℃热浴 10 min
    通过加热进一步促进样品处理和核酸释放,为后续PCR检测做准备。

  9. 取 10 μL 上清液
    热处理后取上清液,减少固体杂质对后续PCR反应的影响。

  10. 加入 90 μL Buffer B
    对上清液进行进一步处理,形成适合后续PCR检测的样品体系。

  11. 振荡混匀
    使样品与Buffer B充分混合,保证处理均一。

  12. 样品处理完成,待PCR检测
    最终得到处理后的样品模板,可用于后续PCR扩增及检测。