标准概述
BJS 202605《食品中多种动物源性成分检测 实时荧光 PCR 法》是国家市场监督管理总局于 2026 年 6 月 25 日发布的食品补充检验方法，代替 BJS 201904。该方法通过物种特异性引物、探针扩增样品 DNA，依据荧光扩增曲线和 Ct 值对 15 类动物源性成分进行定性鉴别，为打击肉类掺假、掺杂提供更全面的技术依据。
适用范围
适用于畜禽肉及副产品、肉制品、乳制品、复合调味料、畜禽肉罐头，及其他含动物成分的食品中牛、羊、猪、黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊、鸡、鸭、鹅、驴、马、兔、鼠共 15 类源性成分的定性检测。
注：牛源性包括黄牛、水牛、牦牛；羊源性包括山羊、绵羊；鼠源性包括海狸鼠、小鼠、大鼠、豚鼠和竹鼠。
核心技术方法
原理：用物种特异性引物、探针对样品 DNA 进行实时荧光 PCR 扩增，根据扩增曲线和 Ct 值定性判定。
样品前处理：多部位取样（不少于 6 个点位，优先取肌肉组织），均质混匀后 -20 ℃ 保存；液体样品混匀分装。
DNA 提取：CTAB 裂解（65 ℃ 孵育 1~2 h）—苯酚-三氯甲烷-异戊醇抽提—异丙醇沉淀—70% 乙醇洗涤，TE 缓冲液溶解；也可用等效商品化试剂盒。DNA 浓度宜为 1~100 ng/μL，A260/A280 宜为 1.5~2.0。
PCR 扩增：25 μL 反应体系（2× 预混液 12.5 μL，上/下游引物、探针各 0.4 μL，模板 1.0 μL，水补足）；程序为 95 ℃ 5 min；35 个循环（95 ℃ 15 s，58 ℃ 1 min，收集荧光）。
引物探针：15 个目标物种均基于线粒体基因设计（驴为 nad5 基因，其余为 cytb 基因），探针 5' 端 FAM 标记、3' 端 BHQ1 修饰；完整序列见标准原文表 1。
试验对照：每个样品设阳性、阴性、空白对照，均做两个平行，取平均 Ct 值。
结果判定：Ct 值 ≤ 30.0 判为阳性（检出 ×× 源性成分）；Ct 值 ≥ 35.0 判为阴性（未检出）；30.0 < Ct < 35.0 需重复试验后判定。
质量控制：空白及阴性对照应无 FAM 荧光信号，阳性对照应有典型扩增曲线且 Ct 值 ≤ 30.0，否则结果无效。防污染措施按 GB/T 27403 执行。
关键改进亮点
检测物种由 6 类扩充至 15 类，新增牛、羊、黄牛、水牛、鸡、鸭、鹅、马、兔 9 种源性成分；
牛、羊不再细分品种时可用通用引物检测，黄牛、水牛、牦牛、山羊、绵羊可分别鉴定到具体品种；
更改了样品前处理、PCR 扩增、试验对照及结果判定方法，删除原污染判定条款；
新增方法检出限规定：1%（质量分数）。
精密度要求
样品、阳性对照、阴性对照和空白对照均设置两个平行反应体系，取平均 Ct 值作为最终结果； Ct 值处于 30.0~35.0 之间的可疑结果须重复试验复核，保证判定的重复性与可靠性。
技术文档附件
本方法标准全文（含引物探针序列表、PCR 反应体系表及附录 A 各物种基因扩增靶标参考序列）详见附件：BJS 202605《食品中多种动物源性成分检测 实时荧光 PCR 法》官方全文 PDF。适用于检测机构、食品生产企业及监管单位参考使用。
